熒光量子產率光譜校正方法

由于受到激發(fā)光源、單色器和光電接收器的光譜特征的影響，不同熒光分光光度計記錄的熒光光譜并不相同。這樣的光譜稱為實驗光譜或者未經校正的激發(fā)光譜，不能用來計算物質的熒光量子產率，所以需要對這些光譜進行校正。

注：儀器出廠之前存有校正光譜，用戶可根據需求重新校正。

1、激發(fā)光譜的測量和校正

校正熒光分光光度計激發(fā)光譜時，將羅丹明B標準溶液放進樣品室內的樣品架上。由于羅丹明B標準溶液在200-600nm波長范圍內的激發(fā)光譜應為一水平直線，所以可以用來校正熒光分光光度計200-600nm波長范圍內的激發(fā)光譜特征。

1.1、操作步驟

（1）將羅丹明B標準溶液放進樣品室標準樣品架

（2）打開設置點擊光譜校正按鈕進入光譜校正界面

（2）選取激發(fā)（200-600nm）選項，點擊測量，系統(tǒng)會自動更新現(xiàn)有圖譜。

2、發(fā)射光譜的測量和校正

校正發(fā)射光譜時，分兩種情況：

（1）不使用積分球測量量子效率時：

在樣品架處放置一個散射附件，通過熒光分光光度計激發(fā)單色器和發(fā)射單色器同步掃描可以獲得激發(fā)和發(fā)射兩方疊加作用的光譜特征。將這個光譜特征曲線除以先前得到的激發(fā)光譜特征曲線，即可得到儀器200-600nm波長范圍內的發(fā)射光譜特征。

（2）使用積分球測量量子效率時：

將熒光分光光度計樣品架拆下，裝上積分球。詳見積熒光量子產率附件的安裝介紹。通過激發(fā)單色器和發(fā)射單色器同步掃描可以獲得激發(fā)和發(fā)射兩方疊加作用的光譜特征。將這個光譜特征曲線除以先前得到的激發(fā)光譜特征曲線，即可得到儀器200-600nm波長范圍內的發(fā)射光譜特征。

2.1、操作步驟

（1）將積分球或者散射附件裝入樣品室。

（2）選取光譜校正界面發(fā)射（200-600nm）選項，點擊測量，系統(tǒng)會自動更新現(xiàn)有圖譜。

3、發(fā)射光譜長波區(qū)域內的測量和校正

對于發(fā)射光譜而言，為了對600nm以上波長區(qū)域進行光譜校正，則需要將一個已知光譜特征的標準光源照射到發(fā)射單色器中，從而求出發(fā)射光譜長波區(qū)域內的光譜特征。選擇1601272標準光源可以校正波長為500-900nm范圍內的光譜。加上短波長羅丹明B的校正方法，可以校正涵蓋200-900nm的波長范圍。

3.1、校正所需附件及安裝

（1）標準光源及電源

1601272標準光源采用穩(wěn)定的直流恒流源供電，所以需要配合使用精密直流穩(wěn)流電源。

3.2、電源及標準光源使用說明

（1）電源打開后預熱30分鐘以上。

（2）按下DISPLAY SETTING按鍵，點亮指示燈后，設置電壓為8V，電流為1600mA,確認設定值后按下OUTPUT按鍵，輸出指示燈點亮，此時電壓窗口顯示值應小于8V，電流窗口顯示1600mA,穩(wěn)流（CC）指示燈亮起，穩(wěn)壓(CV)指示燈滅，表明儀器進入穩(wěn)流狀態(tài)。

（3）標準光源點亮十分鐘后開始定標校正。

注意：標準光源點亮時不能受到震動，因為燈絲發(fā)熱時比較脆弱易變形。

（4）定標完成后，按一下復位鍵再斷開光源兩端導線，然后關閉電源。

 

3.3、操作步驟

（1）打開熒光分光光度計軟件設置點擊光譜校正按鈕進入光譜校正界面

（2）選取光譜校正界面發(fā)射（500-900nm）選項，點擊測量，系統(tǒng)會自動更新現(xiàn)有圖譜。

4、光譜校正取消的方法

點擊光譜校正界面恢復默認按鈕即可。